一、前言
佐劑是疫苗的一種添加劑,當它先于抗原或與抗原混合注入機體后,能夠增強機體對抗原的免疫應答或者改變免疫反應的類型,屬于非特異性的免疫增強劑。隨著現代生物技術和基因工程技術的迅速發展,針對不同疾病已開展了各種*基因工程疫苗的研制,佐劑尤其是*免疫佐劑的研究就顯得尤為迫切。
在標準 T/CVDA02《復合礦物油動物疫苗佐劑》中,對于佐劑的質量檢測中有明確規定測定羥值含量,本方法參考其中的檢測方法制定了運用電位滴定檢測的方法。該方法檢測方便,減少了人為判斷指示劑顏色對結果的誤差影響,增加了檢測度,并且提高了檢測效率,解放操作員的雙手。
二、儀器與試劑
2.1、儀器
JH-T6 全自動電位滴定儀,PH 復合電極,水浴鍋,分析天平等。
2.2、試劑
酰化試劑(取對甲苯磺酸 14.4g, 置干燥的 500ml 具塞錐形瓶中,加醋酸乙酯 360ml,振搖使溶解,緩緩加入醋酐 120ml 搖勻,密塞,放置 3 日后備用),吡啶-水(3:5),氫氧化鉀標準滴定液(1mol/L)。
三、實驗方法
3.1、樣品檢測
準確稱取 2g 左右樣品,置于滴定杯中,加入 5mL 酰化試劑,封口膜密封,輕輕搖動至溶解。置于 50℃水浴加熱 25min ,放冷,加吡啶-水(3:5)20mL ,5 分鐘后用氫氧化鉀標準滴定液(1mol/L),以 PH 復合電極為工作電極,在JH-T6上進行滴定至終點。同時做空白實驗。
設定滴定儀參數如表 1 所示:
表 1 滴定參數設置
|
滴定模式: |
動態滴定 |
*小添加體積 |
0.02mL |
|
電極平衡時間: |
4s |
預攪拌時間: |
60s |
|
電極平衡電位: |
1mv |
滴定速度: |
標準 |
|
結束體積: |
10mL |
相關系數: |
12.69 |
|
電位突躍量: |
200 |
補液速度: |
5 |
|
攪拌速度: |
7 |
滴定前平衡電位: |
10mv |
3.2、圖譜測試示例
四、結果與討論
4.1、實驗結果
實驗結果如表 2 所示:
表 2 測試結果
|
樣品批號 |
樣品序號 |
樣品質量/g |
滴定液濃度(氫氧化鉀) /(mol/L) |
滴定體積/mL |
羥值(mg/g) |
平均值 |
|
20211201 |
空白 |
/ |
1.01838 |
26.225 |
/ |
/ |
|
1 |
2.01652 |
25.475 |
21.249 |
23.301 |
||
|
2 |
2.01019 |
25.386 |
23.802 |
|||
|
3 |
2.01160 |
25.350 |
24.851 |
|||
|
20220101 |
1 |
2.02788 |
25.365 |
24.229 |
24.335 |
|
|
2 |
2.09250 |
25.326 |
24.545 |
|||
|
3 |
2.03595 |
25.361 |
24.231 |
4.2、結論
本次測定的動物疫苗佐劑的羥值均小于參考標準要求中的 25(mg/g),測試結果重復性良好,滿足檢測要求。
參考文獻
[1] T/CVDA02 復合礦物油動物疫苗佐劑[ S ].
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